Deksmedetomidinin İmmortalize Shcwann Hücrelerinde Yüksek Glukozun İndüklediği Apopitoza Karşı Koruyucu Etkisinin Araştırılması
Meltem Türkay, Seda Süsgün, İsmail Sümer, Fahri Akbaş
Bezmialem Vakıf Üniversitesi
Giriş: Diyabetik nöropati (DN), diyabetin en sık görülen mikrovasküler komplikasyonlarından biridir. Artmış hücresel reaktif oksijen seviyeleri (ROS) sinir fonksiyonunu bozar ve DN gelişir(1).Deksmedetomidin, sedatif etkisi nedeniyle yoğun bakım ünitelerinde yaygın kullanılan güçlü bir α2-adrenerjik agonisttir. Apoptotik hücre popülasyonunu, hücre içi ROS ve mitokondrial ROS üretimini azalttığı bilinmektedir(2,3). Çalışmamızda, schwann hücrelerinin in-vitro kültür modelinde deksmedetomidinin yüksek glukozla indüklenen diyabetik apopitoza karşı protektif etkisini araştırdık.
Gereç ve Yöntem: Çalışmada fare immortalize schwan hücre hatları (IMS32) kullanıldı. Apoptozu indüklemek için 37 °C'de 24 saat boyunca IMS32 kültüründe 25mM (normal) ve 100mM d-glikoz (yüksek) doz uygulandı. IMS32 hücreleri, deksmedetomidinle 6 saat, 0.01, 0.1, 1, 10, 100, 500, 1000 ve 5000 μM konsantrasyonlarında 37 °C'de inkübe edildi. Hücre canlılığı MTT testiyle değerlendirildi. Hücre örnekleri homojenize edildi, ticari kit kullanılarak total RNA izole edildi. Saflaştırılmış RNA örneklerinden cDNA sentezi gerşekleştirildi. Elde edilen cDNA’lardan, apopitoz ve inflamasyon parametleri olan TNF-α, IL-1, IL-6, GFAP, VIM, BMP, STAT3, FASLG, PTEN, BAX, BCL2, COX-2 gen ekspresyon düzeyleri qRT-PCR yöntemiyle incelendi. İstatistiksel analiz Windows tabanlı bir SPSS yazılımı ile eşlenmemiş iki kuyruklu Student t testi kullanılarak yapılması, P <0.05 ise anlamlı kabul edilmesi planlandı
Bulgular: Bulgular Resim1-7 arasında gösterilmiştir.
Tartışma ve Sonuç: Normal fare hücre dizilerinden biri olan IMS32, olgun Schwann hücrelerinin bazı biyolojik özelliklerine sahiptir(4). IMS32 hücrelerinin hiperglisemik koşullarda, DN’nin patogenezini araştırmakta kulllanılabileceği önerilmiştir(5). Bu nedenle çalışmamızda IMS32 hücre hatları kullanmayı tercih ettik.Hiperglisemik koşullarda mitokondriyal disfonksiyon tarafından indüklenen oksidatif hasarın apoptotik kaskadını tetikleyebileceği bilinmektedir. Ancak bazı çalışmalarda hipergliseminin kültürlenmiş Schwann hücrelerinde güçlü bir apoptoz indükleyicisi olup olmadığı tartışmalı bulunmuştur. IMS32'de yüksek glukozla indüklenen apoptoz geliştiremeyen ve yüksek glikoz yükünün Schwann hücreleri tek başına hücre ölümü için yeterli olmadığını ileri süren çalışmalarda mevcuttur(4,6). Bizim çalışmamızın sonuçları bu çalışmaları destekledi, apopitoz bulgusu saptayamadık. Çalışmamızda varsayımızı destekleyen bulgulara ulaşamamış olsak da sonucumuzu sunmaya karar verdik. Sonuç olarak hiperglisemik ortamda IMS32 üzerinde gelişebilecek apopitozla ilgili yeni metodlar araştıran çalışmaların gerekli olduğunu düşünmekteyiz.
|