Hipoksinin BEAS-2B hücrelerindeki serbest amino asit profili üzerindeki etkilerinin incelenmesi
Selçuk Seçilmiş, Nuray Altay, İsmail Koyuncu, Şükrü Akmeşe, Ebru Temiz, Ataman Gönel, Evren Büyükfırat
Harran Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Anesteziyoloji ve Reanimasyon A.B.D.
Giriş: İn-vitro metabolomik çalışmamızda, normal insan bronşiyal epitel hücrelerinde (BEAS-2B) farklı hipoksi seviyelerinin serbest amino asit profillerindeki etkilerini araştırdık.
Gereç ve Yöntem: BEAS 2B hücreleri %1, %5 , %15 ve %21 Oksijen sevilerine 1 saat maruz bırakıldı. Hücrelere MTT yöntemiyle hücre canlılığı analizi de yapıldı. Hücre içi serbest aminoasit üzerindeki değişimler LC-MS/MS (Sıvı Kromatografisi- Kütle Spektrometresi) yöntemiyle incelenerek kontrol gurubuyla (%21 O2) karşılaştırıldı. BEAS-2B hücreleri 4 gruba ayrıldı. Propofol grubuna 2 μg/mL, Deksmedetomidin grubuna 0.2 ng/mL dozlarında Propofol + Deksmedetomidin grubuna Propofol 2 μg/mL + Deksmedetomidin 0.2 ng/mL grubu birlikte uygulandı. Kontrol grubuna ilaç uygulanmadı. LC-MS/MS yöntemiyle hücre içi serbest aminoasit ölçümü yapıldı. İstatistiksel analiz için SPSS 22.0 ve Metabo Analyst 5.0 programı kullanıldı. Tukey'nin post-hoc testi ile Tek Yönlü Varyans Analizi (ANOVA) kullanılarak gruplar arasındaki önemli ölçüde artan azalan aminoasitler belirlendi
Bulgular: Hipoksi ile beraber hücre canlılığında anlamlı azalma tespit edilmiştir (p<0.05). Gruplardaki örneklerin dağılımını görselleştirmek için PCA (Principal Component Analysis) yapıldı. Analizi yapılan 38 aminoasitin konsantrasyon farklılıklarına göre değerlendirildiğinde gruplarda ayrışmanın olduğu görüldü. Ancak %5 hipoksi grubu ile %15 hipoksi grubu arasında ayrışma kısmen daha azdı. Gruplardaki bu ayrışmaya katkısı olan aminoasitleri ise önem sırasına göre sıralamak için VIP grafiği oluşturuldu (Şekil 1,2). VIP skoru en yüksek çıkan aminoasitler sırasıyla 3-Metilhistidin, 1-Metilhistidin, Alfa Aminopimelik Asit. %1 hipoksi grubuna göre diğer hipoksi gruplarında 3-Metilhistidin, 1-Metilhistidin seviyeleri belirgin bir şekilde azalmış, Alfa Aminopimelik Asit seviyesi ise belirgin bir şekilde artmıştır. Analizi yapılan 38 aminoasitin gruplardaki yoğunluklarını görselleştirmek için ısı haritası çizildi (Şekil 3). Isı haritasında kahverengi bantlar aminoasitlerin up-regüle edildiğini mavi bantlar ise down-regüle edildiğini göstermektedir. Renklerinin derinliğinin artması gruplar arasındaki farkı göstermektedir.
Tartışma ve Sonuç: Hipoksinin in vitro hücresel metabolomik etkilerinin incelendiği bu çalışma sonucunda, hipoksi şiddetinin artmasıyla 3-Metilhistidin, 1-Metilhistidin’in arttığı, Alfa Aminopimelik Asit seviyelerinin azaldığını tespit ettik. Hücresel hipoksi maruziyetini ön görmede, hipoksinin fizyopatolojisinin anlaşılmasında çalışma sonuçlarımızın ileri klinik ve in-vivo çalışmalara öncü olacağını düşünmekteyiz
|